Tribbles同源蛋白3抑制人脂肪间充质干细胞成脂向分化

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的:研究Tribbles同源蛋白3(Tribbles pseudokinase 3,TRIB3)在人脂肪间充质干细胞(human adiposederived mesenchymal stem cells,h ASCs)成脂分化中的调控作用,为提高h ASCs成脂向分化能力、并为基于h ASCs的脂肪组织工程与软组织缺损修复提供新靶点与新思路。方法:通过慢病毒转染建立TRIB3稳定敲低(TRIB3敲低组)和过表达(TRIB3过表达组)的h ASCs细胞系,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹实验(Western blot)检测慢病毒转染h ASCs的转染效率和效果。通过油红O染色和定量、qRT-PCR等实验方法,检测敲低、过表达TRIB3对h ASCs成脂分化能力的影响。结果:TRIB3敲低慢病毒转染后,TRIB3敲低组h ASCs中TRIB3 mRNA表达量较对照组下降84.3%(P <0.01),TRIB3蛋白表达也显著下降,表明成功构建了TRIB3敲低的h ASCs细胞系; TRIB3过表达慢病毒转染后,TRIB3过表达组TRIB3mRNA表达量较对照组增高约1.6倍(P <0.01),TRIB3蛋白表达也显著升高,表明成功构建了TRIB3过表达的h ASCs细胞系。在此基础上,油红O染色显示,TRIB3敲低的h ASCs成脂诱导后胞浆内红色脂滴明显增多,定量结果表明TRIB3敲低组油红O着色较对照组显著增多(P <0.01)。与之相反,TRIB3过表达的h ASCs成脂诱导后胞浆内红色脂滴明显减少,定量结果表明TRIB3敲低组油红O着色较对照组显著减少(P <0.01)。qRT-PCR结果显示,敲低TRIB3的h ASCs成脂诱导后,成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferatoractivated receptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)和白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36) mRNA水平显著升高(P <0.01); TRIB3过表达的h ASCs成脂诱导后成脂分化相关基因PPARγ、CD36和脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL) mRNA水平明显下降。结论:TRIB3能够调控h ASCs成脂分化能力,敲低TRIB3促进h ASCs成脂分化,过表达TRIB3抑制h ASCs成脂分化。

【关键词】 人脂肪间充质干细胞 Tribbles同源蛋白3 成脂分化

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